پورسائن سرکووائرس کی قسم-Ⅱ اینٹی باڈی ELISA ڈیٹیکشن کٹ
ماڈل نمبر: VD510E
Abbr.:PCV-Ⅱ اب ایلیسا
نمونہ: سیرم
تصریح
تفصیلات
PCV-Ⅱ اب ایلیسا
مطلوبہ استعمال:
پورسائن سرکووائرس کی قسم-Ⅱ اینٹی باڈی ELISA ڈیٹیکشن کٹ وٹرو میں سور کے سیرم میں مخصوص PCV اینٹی باڈی کے تعین کے لیے ہے۔ اس ٹیسٹ کا استعمال خنزیر کے سرکووائرس قسم-Ⅱ خنزیر کے فارموں کی ویکسین سے حفاظتی ٹیکے لگانے کے لیے کیا جاتا ہے۔
نمونہ:سیرم
فراہم کردہ مواد:
ٹیسٹ کے طریقہ کار اور تشریح
مرحلہ 1 ٹیسٹ کا طریقہ کار
1.1 دھونے کے حل کی تیاری
کام کرنے والے ارتکاز واشنگ مائع: استعمال کرنے سے پہلے، واش محلول کو کمرے کے درجہ حرارت (20-25 ڈگری) پر بحال کرنا چاہیے اور اسے یکساں بنانے کے لیے یکساں طور پر ہلانا چاہیے۔ پھر پیوریفائیڈ واشنگ سلوشن کو پیوریفائیڈ واٹر سے 20 بار پتلا کریں (مثال کے طور پر 95 ملی لیٹر پیوریفائیڈ واٹر میں 5 ملی لیٹر گاڑھا ہوا دھونے کا محلول شامل کیا جاتا ہے)، اچھی طرح مکس کریں، اور دھلنے والے مائع کو 2-8 ڈگری پر 7 دنوں کے لیے محفوظ کیا جا سکتا ہے۔
1.2 نمونے کی تیاری
① جانوروں کا پورا خون لیا گیا، 10 منٹ کے لیے 4000rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا، اور سپرنٹنٹ جمع کیا گیا۔ سیرم کو بغیر ہیمولائسز کے قدرتی طور پر جمایا جا سکتا ہے۔
② سیرم کے نمونے کو 1:25 پر پتلا کریں (5ul سیرم کا نمونہ 120ul نمونے میں ملا دیں) اور اچھی طرح مکس کریں۔
نوٹ: منفی اور مثبت کنٹرول کو کم کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔
1.3 انزائم کنجوگیٹ تیاری
انزائم کنجوگیٹ 1:25 کو پتلا کریں (5ul انزائم کنجوگیٹ کو 120ul انزائم ڈائیلوئنٹ میں شامل کریں) اور اچھی طرح مکس کریں۔
1.4 ٹیسٹ کا طریقہ کار
① انزائم لیبل مائیکرو پلیٹ لیں (نمونوں کی تعداد کے مطابق، اسے الگ کیا جا سکتا ہے اور اسے کئی بار استعمال کیا جا سکتا ہے)، انزائم لیبل مائیکرو پلیٹ میں 100ul ڈالیں، منفی اور مثبت نمونوں کے لیے دو کنویں سیٹ کریں، اور رد عمل پر منفی اور مثبت کنٹرول کے لیے 100ul ہر ایک کو شامل کریں۔ پلیٹ کو ڈھانپنے کے لیے سیلنگ پلیٹ فلم کا استعمال کرتے ہوئے نمونے کو آہستہ سے کنویں میں ہلائیں، اور 37 ڈگری پر 30 منٹ تک سینکیں۔
②سیلنگ پلیٹ فلم کو کھولیں، پلیٹ میں موجود محلول کو اچھی طرح سے ہلائیں، ہر کنویں میں 300µl ورکنگ کنسنٹریشن واشنگ مائع ڈالیں، اور پھر اس مائع کو کنویں میں پھینک دیں۔ مندرجہ بالا اقدامات کو 5 بار دہرائیں، اور آخر میں ایک صاف جاذب کاغذ پر خشک کریں۔
③ہر کنویں میں 100µl Enzyme Conjugate شامل کریں، پلیٹ کو ڈھانپیں، اور 37 ڈگری پر 45 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
④سیلنگ پلیٹ فلم کو کھولیں، پلیٹ میں محلول کو اچھی طرح سے ہلائیں، ہر کنویں میں 300µl ورکنگ کنسنٹریشن واشنگ مائع ڈالیں، اور پھر اس مائع کو کنویں میں پھینک دیں۔ مندرجہ بالا اقدامات کو 5 بار دہرائیں، اور آخر میں ایک صاف جاذب کاغذ پر خشک کریں۔
⑤ہر کنویں میں 100µl سبسٹریٹ محلول شامل کریں، پلیٹ کو ڈھانپیں اور روشنی سے 37 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔
⑥ہر کنویں میں 50µl سٹاپ محلول شامل کریں، اور 5 منٹ کے اندر نتیجہ کا تعین کریں۔
مرحلہ 2 نتیجہ کی تشریح
ہر کنویں کی OD450 قدر 96-well microplate ریڈر پر پڑھی گئی۔
2.1 توثیق
منفی کنٹرول کی اوسط OD450nm قدر تھی۔<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥5, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.
2.2 حساب کا طریقہ
ہر نمونے کے لیے، درست نمونہ اور کنٹرول اقدار کا استعمال کرتے ہوئے درج ذیل S/P کا حساب لگائیں۔
S / P=(ODنمونہ-ODاین سی) / (ODپی سی-ODاین سی)
2.3 نتیجہ کی تشریح
جب S/P<0.15, it is judged as negative.
جب S/P 0.25 سے زیادہ یا اس کے برابر ہو تو اسے مثبت سمجھا جاتا ہے۔
جب 0.15 S/P سے کم یا اس کے برابر<0.25, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.
ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: پورسائن سرکووائرس قسم
کا ایک جوڑا: اینٹی جی پورکین سیڈورابیس وائرس اینٹی باڈی ایلیسا کٹ
اگلا: نہيں
